消毒剂效力验证：设计试片挑战研究

为何需要开展现场研究

EN 13697 或 EN 17126 等标准试验表明产品在规定的实验室条件下有效。但这些试验并不涵盖现场的表面饰面、环境微生物、稀释度、接触时间或操作人员擦拭及喷洒的方式。USP <1072> 描述了基于表面挑战试验的现场特定方法，而 EU GMP Annex 1 要求证明消毒效力。试片研究正是这种证明方式。其所支持的整体方案介绍见 消毒剂轮换与杀芽孢剂.

研究设计

决策事项	典型选择
表面	洁净室中每种主要材料的试片：不锈钢、环氧树脂或乙烯基地板、玻璃、聚碳酸酯、墙板及帘幕材料。
微生物	现场监测回收的环境分离菌，以及参考菌株，例如一种革兰氏阳性菌、一种革兰氏阴性菌、一种酵母菌、一种霉菌和一种产芽孢菌。
接种量	应足以测量目标下降幅度，并留有余量；通常每片约接种 105–106 个微生物
消毒剂	使用中的每种产品，均应采用实际使用稀释度，并在其规定有效期的末期进行试验。
接触时间	采用 SOP 规定的时间，并且通常还设置一个较短时间，以证明存在效力余量。
重复设置	每种组合至少设置三片试片，另设对照。

操作步骤

1. 制备试片。 将每种材料切割成试片，进行清洁和灭菌。试片尺寸应使回收方法能够覆盖整个表面。
2. 接种并干燥。 将已知体积的微生物悬液涂布于每片试片，并在受控条件下使其干燥。表面上干燥后的微生物比悬液中的微生物更难杀灭。
3. 施用消毒剂。 按照 SOP 规定的方式施用，包括喷洒、擦拭或浸润，并保持至规定接触时间结束。
4. 中和。 在接触时间结束时，将试片转移至经过验证的中和液中，以终止消毒剂作用。
5. 回收。 通过冲洗、拭子擦拭或接触碟回收存活微生物，并采用平皿计数法计数。
6. 设置对照。 采用相同方式处理对照试片，但使用无菌水等不具消毒作用的液体代替消毒剂。

计算对数级下降

采用对照试片回收的微生物数量，而非接种数量，可以将消毒剂作用与干燥及回收过程中的损失区分开来。

中和剂验证

如果消毒剂在接触时间结束后仍继续发挥作用，或中和剂本身会杀灭微生物，研究就会高估效力。通常针对每种消毒剂和每种微生物进行以下两项检查：

• 有效性： 加入消毒剂与中和剂混合物中的微生物，其回收水平应与仅加入中和剂中的微生物相同。
• 毒性： 仅加入中和剂中的微生物，其回收水平应与加入缓冲液中的微生物相同。

常见的接受标准是回收结果相对于比较对象的差异在约 50%（或 0.3 log）以内。

接受标准

微生物类型	常用的表面试验判定标准
细菌繁殖体	降低 ≥ 3 个对数级
细菌芽孢（杀芽孢剂）	降低 ≥ 2 个对数级
真菌	在试验方案中规定，通常根据微生物种类要求降低 2 至 3 个对数级。

这些数值通常取自 USP <1072>。无论采用何种标准，都应在测试前于试验方案中明确规定并说明依据。

实验室研究之后

• 现场确认： 在引入消毒方案或对其进行变更之前与之后，对环境监测结果进行比较。
• 变更控制： 出现新的表面材料、产品、稀释度或微生物趋势时，应重复研究中相关的部分。
• 房间去污： VHP 循环采用不同的验证方法，所用生物指示剂载有约 10⁶ 个芽孢——参见 VHP 的化学指示剂、酶指示剂和生物指示剂.