Validación de la eficacia de desinfectantes: diseño de un estudio de reto con probetas
Los datos del proveedor muestran que un desinfectante funciona en un ensayo de laboratorio. Los inspectores quieren ver que funciona en sus superficies, frente a sus microorganismos y tal como lo aplican sus operarios. Esa evidencia procede de un estudio de reto con probetas. Esta guía explica cómo diseñarlo: elección de superficies y microorganismos, inoculación, aplicación del desinfectante, neutralización, recuperación y cálculo de la reducción logarítmica.
- Las probetas de los materiales de superficie reales se inoculan, se secan, se tratan como indica el PNT, se neutralizan y se recuperan.
- Use sus propios aislados ambientales además de cepas de referencia, incluidos formadores de esporas para los esporicidas.
- La reducción logarítmica es la diferencia entre la recuperación de las probetas control sin tratar y la de las probetas tratadas.
- Debe demostrarse que el neutralizante detiene el desinfectante sin dañar a los microorganismos; de lo contrario, los resultados sobrestiman la eficacia.
- Los niveles de aceptación típicos son 3 log para bacterias vegetativas y 2 log para esporas, definidos y justificados en el protocolo.
Por qué hace falta un estudio propio
Los ensayos normalizados como EN 13697 o EN 17126 demuestran que un producto funciona en condiciones de laboratorio definidas. No cubren sus acabados de superficie, sus microorganismos ambientales, su dilución, su tiempo de contacto ni la forma en que sus operarios limpian o pulverizan. USP <1072> describe un enfoque específico del centro basado en ensayos de reto en superficie, y el Anexo 1 de las GMP de la UE espera que se demuestre la eficacia de la desinfección. El estudio con probetas es esa demostración. El programa al que da soporte se describe en rotación de desinfectantes y agentes esporicidas.
Diseño del estudio
| Decisión | Elección típica |
|---|---|
| Superficies | Probetas de cada material principal de la sala limpia: acero inoxidable, suelo de epoxi o vinilo, vidrio, policarbonato, paneles de pared, material de cortinas |
| Microorganismos | Aislados ambientales recuperados en su monitorización, más cepas de referencia; por ejemplo, una bacteria grampositiva y una gramnegativa, una levadura, un moho y un formador de esporas |
| Inóculo | Suficiente para medir la reducción objetivo con margen; habitualmente unos 105–106 microorganismos por probeta |
| Desinfectantes | Cada producto en uso, a la dilución de uso y al final de su vida útil declarada |
| Tiempos de contacto | El tiempo del PNT y, a menudo, uno más corto para demostrar margen |
| Réplicas | Al menos tres probetas por combinación, más controles |
Procedimiento
- Prepare las probetas. Corte, limpie y esterilice probetas de cada material. Dimensiónelas para que el método de recuperación cubra toda la superficie.
- Inocule y seque. Extienda un volumen conocido de suspensión en cada probeta y déjelo secar en condiciones controladas. Los microorganismos secos sobre una superficie son más difíciles de eliminar que en suspensión.
- Aplique el desinfectante. Aplíquelo como indica el PNT —pulverizado, con paño o por inundación— y déjelo actuar el tiempo de contacto.
- Neutralice. Detenga el desinfectante al final del tiempo de contacto pasando la probeta a una solución neutralizante validada.
- Recupere. Retire los supervivientes por aclarado, hisopado o placa de contacto, y cuéntelos por recuento en placa.
- Controles. Trate las probetas control de la misma forma con un líquido no desinfectante, como agua estéril, en lugar del desinfectante.
Cálculo de la reducción logarítmica
N = microorganismos recuperados por probeta. Use la media de las réplicas. Si no se recupera ningún microorganismo de las probetas tratadas, informe la reducción como «mayor que» el valor calculado con el límite de detección.
Usar la recuperación de las probetas control —y no la cantidad inoculada— separa el efecto del desinfectante de las pérdidas durante el secado y la recuperación.
Validación del neutralizante
Si el desinfectante sigue actuando tras el tiempo de contacto, o el propio neutralizante elimina microorganismos, el estudio sobrestima la eficacia. Normalmente se hacen dos comprobaciones por cada desinfectante y microorganismo:
- Eficacia: los microorganismos añadidos al desinfectante mezclado con neutralizante se recuperan al mismo nivel que los añadidos solo al neutralizante.
- Toxicidad: los microorganismos añadidos solo al neutralizante se recuperan al mismo nivel que los añadidos a un tampón.
Una aceptación habitual es una recuperación dentro de aproximadamente el 50 % (o 0,3 log) de la comparación.
Criterios de aceptación
| Tipo de microorganismo | Criterio habitual en superficies |
|---|---|
| Bacterias vegetativas | Reducción ≥ 3 log |
| Esporas bacterianas (esporicida) | Reducción ≥ 2 log |
| Hongos | Definido en el protocolo, a menudo de 2 a 3 log según el microorganismo |
Estos valores suelen tomarse de USP <1072>. Sean cuales sean sus criterios, defínalos y justifíquelos en el protocolo antes de ensayar.
Después del estudio de laboratorio
- Confirmación en campo: compare los resultados de monitorización ambiental antes y después de introducir o cambiar el programa de desinfección.
- Control de cambios: repita la parte correspondiente del estudio cuando aparezca un nuevo material de superficie, producto, dilución o tendencia de microorganismos.
- Descontaminación de salas: los ciclos VHP se validan de otra forma, con indicadores biológicos que llevan unas 106 esporas; véase indicadores químicos, enzimáticos y biológicos para VHP.
Referencias
USP <1072> Desinfectantes y antisépticos
Anexo 1 de las GMP de la UE (2022), Fabricación de medicamentos estériles
EN 13697, Ensayo cuantitativo de superficie no porosa para la actividad bactericida y/o fungicida
EN 17126, Ensayo cuantitativo en suspensión para la actividad esporicida
Informe técnico PDA n.º 70, Fundamentos de los programas de limpieza y desinfección para instalaciones de fabricación aséptica
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Preguntas frecuentes
¿Cómo se valida la eficacia de un desinfectante en una sala limpia?
Con un estudio de reto con probetas: probetas de los materiales de superficie reales se inoculan con aislados ambientales y cepas de referencia, se tratan como indica el PNT, se neutralizan y se cuentan los supervivientes para calcular la reducción logarítmica.
¿Qué microorganismos deben usarse?
Aislados ambientales de su propia monitorización, más cepas de referencia que cubran bacterias grampositivas y gramnegativas, levaduras, mohos y, para los esporicidas, un formador de esporas.
¿Cómo se calcula la reducción logarítmica?
Reducción logarítmica = log10 de los microorganismos recuperados de las probetas control sin tratar menos log10 de los recuperados de las probetas tratadas.
¿Por qué es necesaria la validación del neutralizante?
Para demostrar que el neutralizante detiene el desinfectante al final del tiempo de contacto y que no elimina por sí mismo los microorganismos. Sin ella, el estudio puede sobrestimar la eficacia.
¿Qué reducción logarítmica es aceptable?
Se usan habitualmente una reducción de 3 log para bacterias vegetativas y de 2 log para esporas en superficies, a menudo basadas en USP <1072>. Los criterios deben definirse en el protocolo.
¿Tiene en mente un espacio o una carga concretos?
Envíenos el volumen, los materiales y lo que necesita demostrar. Un ingeniero le responderá con la configuración recomendada y lo que implicará la validación.
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