Monitorização ambiental em isoladores: partículas, microrganismos viáveis e o problema do VHP

O que deve ser monitorizado

Num isolador de processamento assético, a zona onde o produto, recipientes e fechos estão expostos é de Classe A. O EU GMP Annex 1 (2022) define as mesmas expectativas de qualquer zona de Classe A, aplicadas através da barreira:

Tipo	Método	Quando
Partículas totais	Contagem contínua de partículas ≥ 0.5 µm e ≥ 5 µm com sonda remota perto da zona crítica	Durante todo o processamento crítico, incluindo a montagem do equipamento
Microrganismos viáveis no ar	Placas de sedimentação (cada uma exposta durante um máximo de 4 horas) e amostragem ativa do ar	Durante todo o processamento crítico
Superfícies	Placas de contacto ou zaragatoas em superfícies críticas	No final da operação
Luvas	Impressões de luvas (pontas dos dedos no ágar)	No final da operação e após intervenções críticas

Para Classe A, o limite de microrganismos viáveis é ausência de crescimento, sendo investigado qualquer crescimento. O Annex 1 indica limites de partículas totais de Classe A em operação de 3,520 por m³ de dimensão ≥ 0.5 µm e 29 por m³ de dimensão ≥ 5 µm. Os níveis de alerta inferiores a estes limites, definidos com base no histórico, permitem detetar precocemente tendências.

Onde amostrar

Os locais de amostragem são escolhidos através de uma avaliação de riscos documentada e devem representar o ar e as superfícies que alcançam o produto exposto, sem perturbar o fluxo de ar que o protege. O estudo com fumo é a melhor ferramenta para isso: mostra de onde vem o ar imediatamente antes de alcançar os recipientes abertos e onde uma sonda ou placa ficaria na sua esteira.

• Sondas de partículas perto do ponto de enchimento e da calha de rolhas, orientadas para o fluxo de ar. Mantenha a tubagem de amostragem até ao contador curta e com poucas curvas, pois as partículas — sobretudo ≥ 5 µm — perdem-se em tubagens longas.
• Placas de sedimentação tão perto do produto aberto quanto o processo permita, em posições que não criem remoinhos.
• Amostradores ativos de ar com a cabeça no interior e a bomba no exterior, para não perturbar o equilíbrio de pressão do isolador durante a amostragem.
• Superfícies que contactam com artigos estéreis ou são tocadas durante as intervenções: peças de formato, guias, rebordo da cuba de rolhas.

O problema do VHP

O peróxido de hidrogénio e os meios de cultura não combinam bem. Três situações exigem atenção.

1. Introduzir os meios sem os inutilizar

As placas e cabeças de amostragem são normalmente introduzidas após o ciclo de descontaminação por uma via de transferência descontaminada — um pass box VHP, uma porta de transferência ou a própria antecâmara do isolador. A embalagem exterior tem de ser descontaminada, mas o vapor não pode alcançar o ágar. As placas concebidas para esta utilização têm múltiplas embalagens, removidas uma de cada vez, e a resistência da embalagem ao peróxido deve ser confirmada. As placas que se encontrem dentro do isolador durante o ciclo não são válidas para monitorização.

2. Peróxido residual nas placas expostas

Após o arejamento, permanece um nível baixo de peróxido de hidrogénio no ar, e os materiais continuam a libertá-lo. As placas de sedimentação expostas durante horas absorvem-no. Em níveis suficientemente elevados, pode inibir o crescimento dos microrganismos que se depositam na placa — produzindo uma falsa «ausência de crescimento». A defesa é um ensaio de promoção de crescimento em condições reais: exponha as placas no isolador durante todo o período de exposição no início de uma operação, inocule-as depois com um número reduzido de organismos de ensaio e confirme a recuperação. Alguns meios são suplementados com catalase ou outros neutralizantes por este motivo.

3. Compatibilidade do equipamento de amostragem

As sondas dos contadores de partículas, cabeças de amostragem e tubagens que permanecem no interior durante o VHP têm de tolerar a exposição repetida e não reter peróxido que seja posteriormente libertado. Sempre que possível, os componentes eletrónicos devem ficar fora do isolador, com apenas a sonda no interior.

Tendências e desvios

Como os resultados de Classe A são quase sempre zero, o valor da monitorização de isoladores está na tendência. Registe os resultados por local, turno, intervenção e dia de campanha; analise-os em conjunto com os resultados de integridade das luvas e os dados de partículas. Qualquer recuperação de microrganismos viáveis em Classe A é investigada, com identificação do organismo, considerando o ciclo de descontaminação, a via de transferência, a integridade das luvas e as intervenções realizadas.

Leituras relacionadas: absorção de peróxido de hidrogénio no enchimento em isolador e Arejamento VHP e H₂O₂ residual.