Мониторинг окружающей среды в изоляторах: частицы, микроорганизмы и проблема VHP
Мониторинг внутри изолятора подчиняется тем же правилам класса A, что и любая критическая зона, но барьер меняет порядок внесения и выноса проб, а пероксид водорода может незаметно снизить чувствительность мониторинга микроорганизмов. В руководстве — что контролировать, где и как не дать VHP исказить результаты.
- Критическая зона внутри асептического изолятора — класс A: непрерывный мониторинг неживых частиц и мониторинг микроорганизмов в течение всей критической обработки.
- Точки отбора проб определяются документированной оценкой рисков — рядом с местом, где открыт продукт, но без нарушения потока воздуха.
- У сред, вносимых в изолятор, внешние поверхности должны быть деконтаминированы так, чтобы пероксид водорода не попал на агар.
- Остаточный пероксид водорода может подавлять рост на экспонированных чашках — ростовые свойства нужно подтверждать в реальных условиях экспозиции.
- Отпечатки перчаток и пробы с поверхностей берут в конце операции, после последнего вмешательства.
Что нужно контролировать
Внутри изолятора для асептической обработки зона, где открыты продукт, тара и укупорка, относится к классу A. Приложение 1 GMP ЕС (2022) устанавливает те же требования, что и для любой зоны класса A, но с учётом барьера:
| Тип | Метод | Когда |
|---|---|---|
| Общее число частиц | Непрерывный подсчёт частиц ≥ 0,5 мкм и ≥ 5 мкм с выносным пробоотборником рядом с критической зоной | На протяжении всей критической обработки, включая сборку оборудования |
| Микроорганизмы в воздухе | Чашки для осаждения (каждая не более 4 часов) и активный отбор проб воздуха | На протяжении всей критической обработки |
| Поверхности | Контактные пластины или смывы с критических поверхностей | В конце операции |
| Перчатки | Отпечатки перчаток (кончики пальцев на агаре) | В конце операции и после критических вмешательств |
Для класса A предел по микроорганизмам — отсутствие роста, и любой рост расследуется. Приложение 1 указывает пределы общего числа частиц для класса A в оснащённом состоянии: 3520 на м³ ≥ 0,5 мкм и 29 на м³ ≥ 5 мкм. Уровни предупреждения ниже этих пределов, установленные по историческим данным, заранее сигнализируют о тенденции.
Где отбирать пробы
Точки отбора проб выбираются по документированной оценке рисков и должны быть репрезентативны для воздуха и поверхностей, контактирующих с открытым продуктом, не нарушая защищающий его поток воздуха. Лучший инструмент для этого — дымовой тест : он показывает, откуда приходит воздух непосредственно перед открытой тарой и где пробоотборник или чашка окажутся в его следе.
- Пробоотборники частиц — рядом с точкой розлива и трактом пробок, навстречу потоку воздуха. Трубка к счётчику должна быть короткой и с минимумом изгибов, поскольку частицы, особенно ≥ 5 мкм, теряются в длинных трубках.
- Чашки для осаждения — как можно ближе к открытому продукту, насколько позволяет процесс, в местах, не создающих завихрений.
- Активные пробоотборники воздуха — головка внутри, насос снаружи, чтобы не нарушать баланс давления в изоляторе во время отбора проб.
- Поверхности — те, что контактируют со стерильными предметами или которых касаются при вмешательствах: форматные детали, направляющие, край бункера пробок.
Проблема VHP
Пероксид водорода и питательные среды плохо сочетаются. Требуют внимания три ситуации.
1. Внести среды и не убить их
Чашки и головки пробоотборников обычно вносят после цикла деконтаминации через деконтаминированный путь передачи — передаточный бокс VHP, порт передачи или собственный шлюз изолятора. Их внешнюю упаковку нужно деконтаминировать, но пар не должен дойти до агара. Чашки для такого применения поставляются в нескольких слоях упаковки, которые снимают по одному, и стойкость упаковки к пероксиду следует подтвердить. Чашки, находившиеся в изоляторе во время цикла, для мониторинга непригодны.
2. Остаточный пероксид на экспонированных чашках
После аэрации в воздухе остаётся небольшое количество пероксида водорода, который продолжает выделяться из материалов. Чашки для осаждения, экспонируемые часами, его поглощают. При достаточно высоком уровне он может подавлять рост осевших на чашку микроорганизмов и давать ложное «роста нет». Защита — тест ростовых свойств в реальных условиях: экспонировать чашки в изоляторе в течение полного времени в начале прогона, затем засеять их небольшим количеством тест-микроорганизмов и подтвердить их выделение. Поэтому в некоторые среды добавляют каталазу или другие нейтрализаторы.
3. Совместимость пробоотборного оборудования
Пробоотборники счётчиков частиц, головки и трубки, остающиеся внутри во время VHP, должны выдерживать многократное воздействие и не удерживать пероксид, который потом выделяется. Электронику по возможности размещают вне изолятора, внутри — только пробоотборник.
Тренды и отклонения
Поскольку результаты в классе A почти всегда нулевые, ценность мониторинга изолятора — в трендах. Записывайте результаты по точкам, сменам, вмешательствам и дням кампании и анализируйте их вместе с результатами проверки целостности перчаток и данными по частицам. Любое выделение микроорганизмов в классе A расследуется с идентификацией организма; в расследовании учитываются цикл деконтаминации, путь передачи, целостность перчаток и выполненные вмешательства.
Связанные материалы: поглощение пероксида водорода при розливе в изоляторе и Аэрация после VHP и остаточный H₂O₂.
Источники
Приложение 1 GMP ЕС (2022), Производство стерильных лекарственных средств
ISO 14644-1, Чистые помещения — Классификация чистоты воздуха по концентрации частиц
ISO 14698-1, Чистые помещения — Контроль биозагрязнений
Технический отчёт PDA № 13, Основы программы мониторинга окружающей среды
Оборудование Fenggu для этой задачи
Изолятор асептического розлива
Встроенная система VHP проводит биодеконтаминацию открытых внутренних поверхностей перед каждой кампанией; однонаправленный поток воздуха, HEPA H14, мониторинг давления и частиц.
Смотреть характеристики →FG-ISO-STИзолятор для испытаний на стерильность
Предусмотренный порт для генератора VHP, позволяющий деконтаминировать камеру и открытые поверхности перед испытанием и снижать число ложноположительных результатов.
Смотреть характеристики →FG-PB-VHPпередаточный бокс vhp
Деконтаминирует внешнюю упаковку сред для мониторинга и компонентов при входе в чистую зону.
Смотреть характеристики →Связанные руководства по применению: Деконтаминация изоляторов и RABS · Клеточная и генная терапия
Частые вопросы
Какой мониторинг окружающей среды требуется внутри асептического изолятора?
Критическая зона относится к классу A, поэтому Приложение 1 GMP ЕС требует непрерывного мониторинга неживых частиц и мониторинга микроорганизмов с помощью чашек для осаждения и активного отбора проб воздуха на протяжении всей критической обработки, а также проб с поверхностей и отпечатков перчаток в конце операции.
Каковы пределы частиц для класса A в оснащённом состоянии?
Приложение 1 (2022) указывает для класса A в оснащённом состоянии 3520 частиц на м³ размером ≥ 0,5 мкм и 29 на м³ размером ≥ 5 мкм. Уровни предупреждения ниже этих значений устанавливаются по историческим данным.
Может ли остаточный пероксид водорода влиять на чашки для осаждения?
Да. Чашки, экспонируемые часами в изоляторе после VHP, поглощают остаточный пероксид, который может подавлять рост микроорганизмов. Ростовые свойства нужно подтверждать на чашках, экспонированных в реальных условиях.
Как вносят чашки для мониторинга в изолятор?
После цикла деконтаминации, через деконтаминированный путь передачи — передаточный бокс VHP или порт передачи — в нескольких слоях упаковки, которые не пропускают пар к агару. Чашки, находившиеся внутри во время цикла, для мониторинга не используются.
Где размещать пробоотборник частиц в изоляторе?
Рядом с местом, где продукт открыт, навстречу потоку воздуха, в точке, подтверждённой дымовым тестом. Пробоотборная трубка должна быть короткой и с минимумом изгибов, чтобы не терять крупные частицы.
Есть конкретное помещение или загрузка?
Сообщите объём, материалы и то, что нужно доказать. Инженер ответит с рекомендуемой конфигурацией и объёмом работ по валидации.