Validação da eficácia de desinfetantes: conceção de um estudo de desafio em provetes
Os dados do fornecedor mostram que um desinfetante funciona num ensaio laboratorial. Os inspetores querem evidência de eficácia nas suas superfícies, contra os seus organismos e com a aplicação dos seus operadores. Essa evidência vem de um estudo de desafio em provetes. Este guia explica a conceção: escolha de superfícies e organismos, inoculação, aplicação, neutralização, recuperação e cálculo da redução logarítmica.
- Provetes dos materiais reais são inoculados, secos, tratados segundo a SOP, neutralizados e submetidos a recuperação.
- Utilize os seus isolados ambientais e estirpes de referência, incluindo formadores de esporos para esporicidas.
- A redução logarítmica é a diferença entre a recuperação dos controlos não tratados e dos provetes tratados.
- É necessário demonstrar que o neutralizante interrompe o desinfetante sem prejudicar os organismos; caso contrário, sobrestima-se a eficácia.
- Níveis típicos de aceitação: 3 log para bactérias vegetativas e 2 log para esporos, definidos e justificados no protocolo.
Porque é necessário um estudo da instalação
Ensaios normalizados como EN 13697 ou EN 17126 demonstram a eficácia em condições laboratoriais definidas. Não abrangem os seus acabamentos, organismos ambientais, diluição, contacto ou modo de aplicação dos operadores. A USP <1072> descreve uma abordagem específica da instalação baseada em desafios de superfície, e o EU GMP Annex 1 prevê demonstração da eficácia da desinfeção. O estudo em provetes é essa demonstração. O programa global que apoia é descrito em rotação de desinfetantes e agentes esporicidas.
Conceção do estudo
| Decisão | Escolha típica |
|---|---|
| Superfícies | Provetes de cada material principal da sala limpa: aço inoxidável, pavimento epóxi ou vinílico, vidro, policarbonato, painéis de parede, material de cortinas |
| Organismos | Isolados ambientais recuperados na monitorização e estirpes de referência — por exemplo, bactéria Gram-positiva e Gram-negativa, levedura, bolor e formador de esporos |
| Inóculo | Suficiente para medir a redução-alvo com margem — frequentemente cerca de 105–106 organismos por provete |
| Desinfetantes | Cada produto utilizado, na diluição de utilização e no fim da validade declarada |
| Tempos de contacto | O tempo da SOP e frequentemente um tempo menor para demonstrar margem |
| Réplicas | Pelo menos três provetes por combinação, além dos controlos |
Procedimento
- Preparar os provetes. Corte, limpe e esterilize provetes de cada material. Dimensione-os para que o método de recuperação abranja toda a superfície.
- Inocular e secar. Distribua um volume conhecido de suspensão em cada provete e deixe secar em condições controladas. Organismos secos numa superfície são mais difíceis de eliminar do que em suspensão.
- Aplicar o desinfetante. Aplique segundo a SOP — pulverização, pano ou cobertura líquida — e deixe atuar durante o tempo de contacto.
- Neutralizar. Interrompa o desinfetante no fim do contacto, transferindo o provete para uma solução neutralizante validada.
- Recuperar. Remova os sobreviventes por enxaguamento, zaragatoa ou placa de contacto e enumere por contagem em placa.
- Controlos. Trate os provetes de controlo da mesma forma com líquido não desinfetante, como água estéril, em vez de desinfetante.
Cálculo da redução logarítmica
N = organismos recuperados por provete. Utilize a média das réplicas. Se não recuperar organismos dos provetes tratados, reporte a redução como «superior a» ao valor calculado com o limite de deteção.
Utilizar a recuperação dos controlos — não o número inoculado — separa o efeito do desinfetante das perdas durante secagem e recuperação.
Validação do neutralizante
Se o desinfetante continuar a atuar após o contacto ou o neutralizante eliminar organismos, o estudo sobrestima a eficácia. Fazem-se geralmente duas verificações por desinfetante e organismo:
- Eficácia: os organismos adicionados ao desinfetante misturado com neutralizante são recuperados ao mesmo nível dos adicionados apenas ao neutralizante.
- Toxicidade: os organismos adicionados apenas ao neutralizante são recuperados ao mesmo nível dos adicionados a um tampão.
Uma aceitação comum é recuperação dentro de cerca de 50% (ou 0.3 log) da comparação.
Critérios de aceitação
| Tipo de organismo | Critério comum em superfícies |
|---|---|
| Bactérias vegetativas | Redução ≥ 3 log |
| Esporos bacterianos (esporicida) | Redução ≥ 2 log |
| Fungos | Definido no protocolo, frequentemente 2 a 3 log consoante o organismo |
Estes valores são frequentemente retirados da USP <1072>. Quaisquer que sejam os critérios, defina-os e justifique-os no protocolo antes dos ensaios.
Após o estudo laboratorial
- Confirmação no terreno: compare resultados de monitorização ambiental antes e depois da introdução ou alteração do programa de desinfeção.
- Controlo de alterações: repita a parte relevante do estudo quando surgir novo material superficial, produto, diluição ou tendência de organismos.
- Descontaminação de salas: os ciclos VHP são validados de outra forma, com indicadores biológicos que contêm cerca de 106 esporos — consulte indicadores químicos, enzimáticos e biológicos para VHP.
Referências
USP <1072> Disinfectants and Antiseptics
EU GMP Annex 1 (2022), Manufacture of Sterile Medicinal Products
EN 13697, Quantitative non-porous surface test for bactericidal and/or fungicidal activity
EN 17126, Quantitative suspension test for sporicidal activity
PDA Technical Report No. 70, Fundamentals of Cleaning and Disinfection Programs for Aseptic Manufacturing Facilities
Equipamento Fenggu para esta aplicação
Pass box VHP
VHP integrado com monitorização em tempo real da temperatura, humidade, pressão e concentração de H₂O₂, e registos impressos dos ciclos.
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Perguntas comuns
Como se valida a eficácia de desinfetantes numa sala limpa?
Com estudo de desafio em provetes: materiais reais inoculados com isolados ambientais e estirpes de referência, tratados segundo a SOP, neutralizados e com contagem dos sobreviventes para calcular a redução logarítmica.
Que organismos devem ser utilizados?
Isolados ambientais da própria monitorização e estirpes de referência que abranjam bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras, bolores e, para esporicidas, um formador de esporos.
Como se calcula a redução logarítmica?
Redução logarítmica = log10 dos organismos recuperados dos provetes de controlo não tratados menos log10 dos organismos recuperados dos provetes tratados.
Porque é necessária a validação do neutralizante?
Para demonstrar que o neutralizante interrompe a ação do desinfetante no fim do contacto e não elimina os organismos. Sem ela, o estudo pode sobrestimar a eficácia.
Que redução logarítmica é aceitável?
São comuns reduções de 3 log para bactérias vegetativas e 2 log para esporos em superfícies, frequentemente baseadas na USP <1072>. Os critérios devem ser definidos no protocolo.
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