Indicadores químicos, enzimáticos e biológicos para VHP: o que cada um lhe revela

Três perguntas, três indicadores

Quando se desenvolve ou verifica um ciclo VHP, surgem três perguntas diferentes em cada local do espaço:

• O vapor chegou aqui? — respondida por um indicador químico.
• Que exposição letal recebeu este ponto em comparação com os outros? — respondida rapidamente por um indicador enzimático.
• Foram eliminados esporos resistentes neste local? — respondida apenas por um indicador biológico.

Confundir estas perguntas é uma fonte comum de problemas. Um indicador químico que mudou de cor é frequentemente interpretado como uma aprovação, quando apenas mostra que esteve presente alguma quantidade de peróxido de hidrogénio.

Indicadores químicos

Um indicador químico (IQ) é uma tira ou etiqueta impressa cuja tinta muda de cor ao reagir com o peróxido de hidrogénio. Os indicadores para VHP são concebidos para o processo com vapor e são classificados de acordo com a ISO 11140-1; a maioria dos que se utilizam em salas e isoladores são indicadores de processo ou de exposição.

• Para que são úteis: são económicos, imediatos e fáceis de colocar em grande número. Mostram rapidamente se o vapor chegou a áreas ocultas, atrás dos equipamentos, ao interior dos armários e à extremidade mais afastada de uma sala.
• O que não conseguem mostrar: se a concentração e o tempo foram suficientes para eliminar esporos. Muitos respondem a uma fração da dose necessária para uma redução de 6 log. Alguns também respondem à condensação de forma diferente da resposta ao vapor.
• Utilização típica: verificações da distribuição durante o desenvolvimento do ciclo, uma verificação rápida após alterações na sala ou na carga e como sinal visível de rotina de que uma carga passou por um ciclo de pass box.

Indicadores enzimáticos

Um indicador enzimático (IE) contém uma camada seca de uma enzima termoestável sobre um suporte. O peróxido de hidrogénio inativa a enzima; em seguida, mede-se a atividade remanescente, geralmente com um leitor de bioluminescência, e compara-se com um controlo não exposto. O resultado é um valor numérico — uma redução logarítmica da atividade enzimática — disponível poucos minutos após o fim do ciclo.

• Para que são úteis: um resultado graduado, em vez de uma simples aprovação ou reprovação, permitindo ordenar os locais da melhor à pior exposição e observar, no próprio dia, o efeito de deslocar um ventilador ou alterar a taxa de injeção.
• O que não conseguem mostrar: a eliminação de esporos. A resposta da enzima tem de ser correlacionada com indicadores biológicos para o processo; trata-se de um indicador substituto rápido, e não de uma alternativa que os dispense.
• Utilização típica: desenvolvimento e otimização de ciclos, identificação de posições de pior caso antes dos ensaios com indicadores biológicos e investigações após uma falha.

Indicadores biológicos

Um indicador biológico (IB) para VHP contém normalmente cerca de 10⁶ esporos de Geobacillus stearothermophilus num suporte de aço inoxidável dentro de uma saqueta permeável ao vapor, fabricado de acordo com a ISO 11138-1. Após o ciclo, os suportes são transferidos para um meio de cultura e incubados a 55–60 °C. A ausência de crescimento significa que a população de esporos foi reduzida em pelo menos seis ordens logarítmicas nesse local.

• Para que são úteis: são os únicos indicadores que medem diretamente a letalidade microbiana, razão pela qual a qualificação e a requalificação periódica se baseiam neles.
• Limitações: os resultados demoram dias, o resultado é crescimento ou ausência de crescimento e os IB individuais variam em resistência. Resultados positivos ocasionais provenientes de um único suporte invulgarmente resistente são um problema conhecido; a forma de os tratar faz parte da abordagem de validação.
• Utilização típica: qualificação do desempenho em localizações de pior caso, requalificação e verificação após alterações significativas.

A ciência por detrás do critério de 6 log e dos valores D é abordada em indicadores biológicos e redução de 6 log; a resposta ao crescimento de um IB é abordada em resolução de falhas de ciclos VHP.

Comparação lado a lado

	Indicador químico	Indicador enzimático	Indicador biológico
O que mede	Presença de H₂O₂	Perda de atividade enzimática	Eliminação de esporos resistentes
Resultado	Mudança de cor	Valor numérico (redução logarítmica da atividade)	Crescimento / ausência de crescimento
Tempo até ao resultado	Imediatamente	Minutos	Dias de incubação
Equipamento necessário	Nenhum	Leitor	Incubadora, meio de cultura e laboratório de microbiologia
Comprova a esterilização?	Não	Não — tem de ser correlacionado com IB	Sim, para o suporte e o local ensaiados
Utilização principal	Mapeamento da distribuição, verificação de rotina da exposição	Desenvolvimento, identificação do pior caso, investigações	Qualificação e requalificação

Utilização conjunta

1. Mapeie com indicadores químicos. Coloque muitos IQ por toda a sala ou isolador, incluindo nos cantos, por baixo dos equipamentos, dentro dos armários e na extremidade mais afastada do gerador. Os locais em que a mudança é lenta ou pouco intensa são candidatos a pior caso.
2. Ajuste com indicadores enzimáticos. Coloque IE nos locais com exposição insuficiente e em alguns pontos de referência. Ajuste a taxa de injeção, o tempo de manutenção, as posições dos ventiladores ou a disposição da carga e compare os resultados no próprio dia.
3. Qualifique com indicadores biológicos. Coloque IB nas localizações de pior caso confirmadas, bem como nas posições exigidas pelo seu protocolo, e execute os ciclos de qualificação.
4. Monitorize de forma rotineira. Em função do risco, utilize IQ em todas as cargas e IB com uma frequência definida ou após alterações.

Posicionamento e manuseamento

• Coloque os indicadores de forma que o vapor os alcance da mesma maneira que alcança a superfície que representam — sem ficarem protegidos por fita adesiva, clipes ou pelo saco em que foram fornecidos.
• Registe cada local num desenho com um identificador e utilize as mesmas posições nos ensaios repetidos.
• Evite colocar indicadores em locais onde a condensação goteje ou se acumule, a menos que essa seja a condição que pretende ensaiar.
• Conserve controlos não expostos do mesmo lote para cada ensaio com indicadores enzimáticos e biológicos.
• Armazene os indicadores conforme as especificações do fabricante; a humidade absorvida e o calor podem alterar a sua resposta.