Validierung der Desinfektionsmittelwirksamkeit: Planung einer Belastungsstudie mit Prüfkörpern
Lieferantendaten zeigen, dass ein Desinfektionsmittel in einer Laborprüfung wirkt. Inspektoren wollen sehen, dass es auf Ihren Oberflächen gegen Ihre Mikroorganismen so wirkt, wie Ihre Bediener es anwenden. Dieser Nachweis wird durch eine Belastungsstudie mit Prüfkörpern erbracht. Dieser Leitfaden behandelt deren Planung: Auswahl von Oberflächen und Mikroorganismen, Beimpfung, Anwendung des Desinfektionsmittels, Neutralisierung, Wiedergewinnung und Berechnung der logarithmischen Reduktion.
- Prüfkörper aus den tatsächlich verwendeten Oberflächenmaterialien werden beimpft, getrocknet, entsprechend der SOP behandelt und neutralisiert; anschließend werden die Mikroorganismen wiedergewonnen.
- Verwenden Sie Ihre eigenen Umweltisolate sowie Referenzstämme, einschließlich Sporenbildnern bei Sporoziden.
- Die logarithmische Reduktion ist die Differenz zwischen der Wiedergewinnung von unbehandelten Kontrollprüfkörpern und derjenigen von behandelten Prüfkörpern.
- Es muss nachgewiesen werden, dass der Neutralisator die Wirkung des Desinfektionsmittels stoppt, ohne die Mikroorganismen zu schädigen; andernfalls wird die Wirksamkeit in den Ergebnissen überbewertet.
- Typische Akzeptanzniveaus sind 3-log für vegetative Bakterien und 2-log für Sporen; sie werden im Prüfprotokoll festgelegt und begründet.
Warum eine standortspezifische Studie erforderlich ist
Standardisierte Prüfungen wie EN 13697 oder EN 17126 zeigen, dass ein Produkt unter festgelegten Laborbedingungen wirkt. Sie decken weder Ihre Oberflächenbeschaffenheiten noch Ihre Umweltmikroorganismen, Ihre Verdünnung, Ihre Einwirkzeit oder die Art ab, wie Ihre Bediener wischen oder sprühen. USP <1072> beschreibt einen standortspezifischen Ansatz auf Grundlage von Oberflächenbelastungsprüfungen, und EU GMP Annex 1 verlangt den Nachweis der Desinfektionswirksamkeit. Die Prüfkörperstudie erbringt diesen Nachweis. Das übergeordnete Programm, das sie unterstützt, wird beschrieben unter Desinfektionsmittelwechsel und sporozide Wirkstoffe.
Studienplanung
| Entscheidung | Typische Auswahl |
|---|---|
| Oberflächen | Prüfkörper aus jedem wesentlichen Material im Reinraum: Edelstahl, Epoxidharz- oder Vinylbodenbeläge, Glas, Polycarbonat, Wandpaneele, Vorhangmaterial |
| Mikroorganismen | In Ihrer Überwachung gewonnene Umweltisolate sowie Referenzstämme — beispielsweise ein grampositives und ein gramnegatives Bakterium, eine Hefe, ein Schimmelpilz und ein Sporenbildner |
| Inokulum | Ausreichend, um die angestrebte Reduktion mit Sicherheitsreserve zu messen — üblicherweise etwa 105–106 Mikroorganismen pro Prüfkörper |
| Desinfektionsmittel | Jedes verwendete Produkt in der Anwendungsverdünnung und am Ende seiner angegebenen Haltbarkeitsdauer |
| Einwirkzeiten | Die in der SOP festgelegte Zeit und häufig eine kürzere Zeit, um die Sicherheitsreserve nachzuweisen |
| Wiederholungsansätze | Mindestens drei Prüfkörper je Kombination zuzüglich Kontrollen |
Verfahren
- Bereiten Sie die Prüfkörper vor. Schneiden, reinigen und sterilisieren Sie Prüfkörper aus jedem Material. Wählen Sie ihre Größe so, dass das Wiedergewinnungsverfahren die gesamte Oberfläche erfasst.
- Beimpfen und trocknen Sie die Prüfkörper. Verteilen Sie ein bekanntes Volumen der Suspension auf jedem Prüfkörper und lassen Sie es unter kontrollierten Bedingungen trocknen. Auf einer Oberfläche angetrocknete Mikroorganismen sind schwerer abzutöten als Mikroorganismen in Suspension.
- Wenden Sie das Desinfektionsmittel an. Wenden Sie es entsprechend der SOP an — durch Sprühen, Wischen oder Fluten — und lassen Sie es für die festgelegte Einwirkzeit einwirken.
- Neutralisieren Sie das Desinfektionsmittel. Stoppen Sie die Wirkung des Desinfektionsmittels am Ende der Einwirkzeit, indem Sie den Prüfkörper in eine validierte Neutralisationslösung überführen.
- Gewinnen Sie die Mikroorganismen wieder. Nehmen Sie die überlebenden Mikroorganismen durch Abspülen, Abstrich oder mit einer Kontaktplatte auf und bestimmen Sie ihre Anzahl durch Plattenzählung.
- Führen Sie Kontrollen durch. Behandeln Sie Kontrollprüfkörper auf dieselbe Weise, jedoch mit einer nicht desinfizierenden Flüssigkeit wie sterilem Wasser anstelle des Desinfektionsmittels.
Berechnung der logarithmischen Reduktion
N = pro Prüfkörper wiedergewonnene Mikroorganismen. Verwenden Sie den Mittelwert der Wiederholungsansätze. Wenn von behandelten Prüfkörpern keine Mikroorganismen wiedergewonnen werden, geben Sie die Reduktion als “größer als” den mit der Nachweisgrenze berechneten Wert an.
Die Verwendung der Wiedergewinnung von Kontrollprüfkörpern — statt der aufgebrachten Anzahl — trennt die Wirkung des Desinfektionsmittels von Verlusten während der Trocknung und Wiedergewinnung.
Neutralisatorvalidierung
Wenn das Desinfektionsmittel nach der Einwirkzeit weiterwirkt oder der Neutralisator selbst Mikroorganismen abtötet, überbewertet die Studie die Wirksamkeit. Für jedes Desinfektionsmittel und jeden Mikroorganismus werden üblicherweise zwei Prüfungen durchgeführt:
- Wirksamkeit: Mikroorganismen, die zu einem Gemisch aus Desinfektionsmittel und Neutralisator gegeben werden, werden in derselben Menge wiedergewonnen wie Mikroorganismen, die nur zum Neutralisator gegeben werden.
- Toxizität: Mikroorganismen, die nur zum Neutralisator gegeben werden, werden in derselben Menge wiedergewonnen wie Mikroorganismen, die zu einem Puffer gegeben werden.
Ein häufiges Akzeptanzkriterium ist eine Wiedergewinnung innerhalb von etwa 50% (oder 0.3 log) des Vergleichswerts.
Akzeptanzkriterien
| Art des Mikroorganismus | Häufig verwendetes Kriterium auf Oberflächen |
|---|---|
| Vegetative Bakterien | ≥ 3-log-Reduktion |
| Bakterielle Sporen (Sporozid) | ≥ 2-log-Reduktion |
| Pilze | Im Prüfprotokoll festgelegt, häufig 2 bis 3-log je nach Mikroorganismus |
Diese Werte werden häufig aus USP <1072> übernommen. Unabhängig davon, welche Kriterien Sie verwenden, legen Sie sie vor der Prüfung im Prüfprotokoll fest und begründen Sie sie.
Nach der Laborstudie
- Bestätigung im Betrieb: Vergleichen Sie die Ergebnisse der Umgebungsüberwachung vor und nach der Einführung oder Änderung des Desinfektionsprogramms.
- Änderungskontrolle: Wiederholen Sie den relevanten Teil der Studie, wenn ein neues Oberflächenmaterial, Produkt, eine neue Verdünnung oder ein neuer Trend bei Mikroorganismen auftritt.
- Raumdekontamination: VHP-Zyklen werden auf andere Weise validiert, mit Bioindikatoren, die etwa 106 Sporen tragen — siehe chemische Indikatoren, Enzymindikatoren und Bioindikatoren für VHP.
Quellen
USP <1072> Disinfectants and Antiseptics
EU GMP Annex 1 (2022), Manufacture of Sterile Medicinal Products
EN 13697, Quantitative non-porous surface test for bactericidal and/or fungicidal activity
EN 17126, Quantitative suspension test for sporicidal activity
PDA Technical Report No. 70, Fundamentals of Cleaning and Disinfection Programs for Aseptic Manufacturing Facilities
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Häufige Fragen
Wie wird die Wirksamkeit von Desinfektionsmitteln in einem Reinraum validiert?
Mit einer Belastungsstudie an Prüfkörpern: Prüfkörper aus den tatsächlich verwendeten Oberflächenmaterialien werden mit Umweltisolaten und Referenzstämmen beimpft, entsprechend der SOP behandelt und neutralisiert. Anschließend werden die überlebenden Mikroorganismen gezählt, um die logarithmische Reduktion zu berechnen.
Welche Mikroorganismen sollten verwendet werden?
Umweltisolate aus Ihrer eigenen Überwachung sowie Referenzstämme, die grampositive und gramnegative Bakterien, Hefen, Schimmelpilze und bei Sporoziden einen Sporenbildner abdecken.
Wie wird die logarithmische Reduktion berechnet?
Logarithmische Reduktion = log10 der von unbehandelten Kontrollprüfkörpern wiedergewonnenen Mikroorganismen minus log10 der von behandelten Prüfkörpern wiedergewonnenen Mikroorganismen.
Warum ist eine Neutralisatorvalidierung erforderlich?
Um zu zeigen, dass der Neutralisator die Wirkung des Desinfektionsmittels am Ende der Einwirkzeit stoppt und die Mikroorganismen nicht selbst abtötet. Ohne diesen Nachweis kann die Studie die Wirksamkeit überbewerten.
Welche logarithmische Reduktion ist akzeptabel?
Häufig werden eine 3-log-Reduktion für vegetative Bakterien und eine 2-log-Reduktion für Sporen auf Oberflächen verwendet, oft auf Grundlage von USP <1072>. Die Kriterien müssen im Prüfprotokoll festgelegt werden.
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Senden Sie Volumen, Materialien und erforderliche Nachweise. Ein Ingenieur antwortet mit einer empfohlenen Konfiguration und erläutert den Validierungsumfang.
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