Indicateurs chimiques, enzymatiques et biologiques pour le VHP : ce que chacun vous indique

Trois questions, trois indicateurs

Lorsqu’un cycle VHP est développé ou contrôlé, trois questions différentes se posent à chaque emplacement de l’espace :

• La vapeur est-elle arrivée ici ? — un indicateur chimique répond à cette question.
• Quelle exposition létale ce point a-t-il reçue par rapport aux autres ? — un indicateur enzymatique répond rapidement à cette question.
• Des spores résistantes ont-elles été tuées ici ? — seul un indicateur biologique répond à cette question.

Confondre ces questions est une source fréquente de problèmes. Un indicateur chimique qui a changé de couleur est souvent considéré comme un résultat conforme, alors qu’il montre seulement la présence d’une certaine quantité de peroxyde d’hydrogène.

Indicateurs chimiques

Un indicateur chimique (IC) est une bandelette ou une étiquette imprimée dont l’encre change de couleur lorsqu’elle réagit avec le peroxyde d’hydrogène. Les indicateurs pour le VHP sont conçus pour le procédé en phase vapeur et classés selon ISO 11140-1 ; la plupart de ceux utilisés dans les salles et les isolateurs sont des indicateurs de procédé ou d’exposition.

• Leurs points forts : ils sont peu coûteux, donnent un résultat instantané et sont faciles à placer en grand nombre. Ils montrent rapidement si la vapeur a atteint des zones cachées, derrière les équipements, à l’intérieur des armoires et à l’extrémité d’une salle.
• Ce qu’ils ne peuvent pas montrer : si la concentration et la durée étaient suffisantes pour tuer les spores. Beaucoup réagissent à une fraction de la dose nécessaire à une réduction de 6 log. Certains réagissent également différemment à la condensation et à la vapeur.
• Utilisation habituelle : les contrôles de distribution pendant le développement du cycle, un contrôle rapide après des modifications de la salle ou de la charge, et une indication visuelle de routine qu’une charge est passée par un cycle de sas de transfert.

Indicateurs enzymatiques

Un indicateur enzymatique (IE) porte une couche séchée d’une enzyme thermostable sur un support. Le peroxyde d’hydrogène inactive l’enzyme ; l’activité restante est ensuite mesurée, généralement à l’aide d’un lecteur de bioluminescence, puis comparée à un témoin non exposé. Le résultat est un nombre — une réduction logarithmique de l’activité enzymatique — disponible quelques minutes après la fin du cycle.

• Leurs points forts : un résultat gradué plutôt qu’une simple conformité ou non-conformité, qui permet de classer les emplacements du mieux au moins bien exposé et de constater le jour même l’effet du déplacement d’un ventilateur ou d’une modification du débit d’injection.
• Ce qu’ils ne peuvent pas montrer : la destruction des spores. La réponse de l’enzyme doit être corrélée aux indicateurs biologiques pour le procédé concerné ; c’est un indicateur de substitution rapide, et non un remplacement.
• Utilisation habituelle : le développement et l’optimisation du cycle, le repérage des emplacements les plus défavorables avant les essais avec indicateurs biologiques et les investigations après un échec.

Indicateurs biologiques

Un indicateur biologique (IB) pour le VHP porte normalement environ 10⁶ spores de Geobacillus stearothermophilus sur un support en acier inoxydable dans un sachet perméable à la vapeur, fabriqué conformément à ISO 11138-1. Après le cycle, les supports sont transférés dans un milieu de culture et incubés à 55–60 °C. L’absence de croissance signifie que la population de spores a été réduite d’au moins six unités logarithmiques à cet emplacement.

• Leurs points forts : ce sont les seuls indicateurs qui mesurent directement la létalité microbienne, raison pour laquelle la qualification et la requalification périodique reposent sur eux.
• Limites : les résultats nécessitent plusieurs jours, le résultat est une croissance ou une absence de croissance, et la résistance varie d’un IB à l’autre. Des résultats positifs occasionnels dus à un seul support exceptionnellement résistant sont un problème connu ; la manière de les traiter fait partie de l’approche de validation.
• Utilisation habituelle : la qualification des performances aux emplacements les plus défavorables, la requalification et la vérification après des modifications importantes.

Les fondements scientifiques du critère de 6 log et des valeurs D sont présentés dans indicateurs biologiques et réduction de 6 log; la conduite à tenir lorsqu’un IB présente une croissance est décrite dans dépannage des échecs de cycle VHP.

Comparaison côte à côte

	Indicateur chimique	Indicateur enzymatique	Indicateur biologique
Grandeur mesurée	Présence de H₂O₂	Perte d’activité enzymatique	Destruction des spores résistantes
Résultat	Changement de couleur	Nombre (réduction logarithmique de l’activité)	Croissance / absence de croissance
Délai d’obtention du résultat	Immédiatement	Quelques minutes	Plusieurs jours d’incubation
Équipement nécessaire	Aucun	Lecteur	Incubateur, milieu de culture, laboratoire de microbiologie
Prouve la stérilisation ?	Non	Non — une corrélation avec les IB est nécessaire	Oui, pour le support et l’emplacement testés
Utilisation principale	Cartographie de la distribution, contrôle d’exposition de routine	Développement, recherche des emplacements les plus défavorables, investigations	Qualification et requalification

Les utiliser ensemble

1. Cartographiez à l’aide d’indicateurs chimiques. Placez de nombreux IC dans toute la salle ou tout l’isolateur, notamment dans les coins, sous les équipements, à l’intérieur des armoires et à l’extrémité la plus éloignée du générateur. Les emplacements où le changement de couleur est lent ou faible sont des candidats possibles aux conditions les plus défavorables.
2. Ajustez à l’aide d’indicateurs enzymatiques. Placez des IE aux emplacements faibles et à quelques points de référence. Ajustez le débit d’injection, la durée de maintien, la position des ventilateurs ou la disposition de la charge, puis comparez les résultats le jour même.
3. Qualifiez à l’aide d’indicateurs biologiques. Placez les IB aux emplacements les plus défavorables confirmés, ainsi qu’aux positions exigées par votre protocole, puis exécutez les cycles de qualification.
4. Assurez une surveillance de routine. Selon le risque, utilisez des IC pour chaque charge et des IB à une fréquence définie ou après des modifications.

Placement et manipulation

• Placez les indicateurs de façon que la vapeur les atteigne comme elle atteint la surface qu’ils représentent — sans qu’ils soient masqués par du ruban adhésif, des pinces ou le sachet dans lequel ils ont été livrés.
• Consignez chaque emplacement sur un plan avec un identifiant et utilisez les mêmes positions lors des essais répétés.
• Évitez de placer les indicateurs là où la condensation goutte ou s’accumule, sauf si c’est la condition que vous cherchez à tester.
• Conservez des témoins non exposés du même lot pour chaque essai avec indicateurs enzymatiques et biologiques.
• Stockez les indicateurs selon les spécifications du fabricant ; l’humidité absorbée et la chaleur peuvent modifier leur réponse.